红细胞形态学检查标准操作程序
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一.目的：规范红细胞形态学检查标准操作
二.适用范围：适用于瑞氏—姬姆萨染色镜检法红细胞形态学检查。
三.支持性文件：全国临床检验操作规程第三版
四.原理：瑞氏—姬姆萨染色镜检法
五.仪器：OLYMPUSCH20显微镜
六.试剂瑞氏—姬姆萨复合染色液
I液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇(分析纯)，研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3min，共5天，以后存放一周即能使用。
Ⅱ液：pH6．4—6．8磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾(无水)6．64g
磷酸氢二钠(无水)2．56g
加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml。
七.样本要求:毛细血管采血使用市售一次性使用的采血针，采血部位成人以左手无名指为宜，半岁以上儿童手指为好，半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟两侧采血。采血时应擦去第一滴血，以免混入组织液影响结果。
八.操作步骤：
1．采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。
2．推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37C温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。
3．染色
(1)瑞氏—姬姆萨染色法：平置玻片于染色架上，滴加染液3～5滴，使其迅速盖满血膜，约lmin后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混和，5～lOmin后用水冲去染液，待干。
4．选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，观察红细胞形态。
5.结果输入上海新和中文操作系统打印报告。
九.异常红细胞形态
1、大小异常
正常红细胞大小较为一致，直径为6～9μm，在各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径10μm者称大红细胞；15μm者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏疾病等；直径6μm者称为小红细胞，多见于缺铁性贫血等疾病。
2、形态异常
(1)球形红细胞
红细胞直径通常6μm，厚度增加，通常2.6μm，因而红细胞呈小圆球形，细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于下列疾病：
a．遗传性球形细胞增多症；
b．自身免疫性溶血性贫血；
c．异常血红蛋白病(HbS及HbC病等)。
(2)椭圆形红细胞
红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。正常人血液中也可见到，但最多不超过15％。这种红细胞增多见于：
1．遗传性椭圆形细胞增多症，一般要高于25％～50％才有诊断价值。
2．大细胞性贫血，可达25％。
3．其他各类贫血都可有不同程度的增多。
(3)靶形红细胞
比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白连接，边缘部染色深，故呈靶状。主要见于：
1．地中海贫血；
2．严重缺铁性贫血；
3．一些血红蛋白病(血红蛋白C、D、E、S病)；
4．肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。
(4)镰形红细胞
细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红细胞增多症。
(5)口形红细胞
红细胞淡染区呈裂口状狭孔。正常4％。增高见于：
1．口形细胞增多症；
2．急性乙醇中毒。
(6)棘形红细胞
棘形红细胞是一种带刺状的红细胞，刺呈针刺状或尖刺状，见于：
1．棘细胞增多症(遗传性血浆p—脂蛋白缺乏症)，可高达70％～80％。
2．严重肝病或制片不当。
(7)皱缩红细胞
红细胞表面有圆形棘刺样突起，可见于干燥太慢的血片，也可见于急性铅中毒、尿毒症等病人的血片上。
(8)锯齿细胞
也称刺毛细胞，形态和皱缩细胞相似。主要见于尿毒症、微血管病性溶血性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。
(9)裂片细胞
指红细胞碎片，包括盔形红细胞等，多见于DIC、微血管病性溶血性贫血和心原性溶血性贫血等红细胞破碎综合征。其他也见于化学中毒、肾功能不全、血栓性血小板减少性紫癜等。
3、染色异常
(1)着色过浅
红细胞中心淡染区扩大，多见于缺铁性贫血、地中海贫血及其他血红蛋白病。
(2)着色过深
中心淡染区不见，着色较深，多见于先天性溶血性贫血及大细胞性贫血患者。
(3)嗜多色性红细胞
红细胞染成灰蓝色、灰红色、淡灰色，较正常红细胞稍大。这是一种尚未完全成熟的红细胞，多染性物质是核糖体，随着细胞的成熟而逐渐消失，主要见于增生性贫血。
4、结构异常
(1)嗜碱性点彩红细胞
用亚甲基蓝染色，成熟红细胞胞浆内有散在的深蓝色嗜碱性颗粒，外周血中点彩红细胞增多，表示贫血时骨髓冉生旺盛或有紊乱现象。某些重金属中毒时，可大量出现。
(2)卡波环
成熟红细胞胞浆内有染成紫红色妒细线状环，呈圆形或8字形，可能是残留核膜所致，见于恶性贫血、溶血性贫血、铅中毒等。
(3)染色质小体和
成熟红细胞中含有紫红色圆形小体，大小不等，数量不一，可能是残留的核染色质微粒。见于增生性贫血、脾切除后、巨幼细胞性贫血、恶性贫血等。
(4)有核红细胞
正常人血片中不见，溶血性贫血、急慢性白血病、红白血病、髓外造血及严重缺氧等常见到。
十.注意事项：
1.制片时，血膜应薄，使红细胞平铺于玻片上。
2.染色时间依室温高低、染液浓度而定。
3.染色结束时，应用流水冲去染液，防止染料沉着于血膜。